GeneBiogist 无缝克隆试剂盒

介绍

不同于普通分子克隆方法，GeneBiogist 无缝克隆试剂盒通过简单的体外一步（同源重组）实现DNA克隆。该方法 极大简化了克隆过程，无论是单链DNA，还是大到几百kb的DNA片段，均可以高效完成克隆构建。只需将 载体质粒线性化，再用PCR法将与载体质粒同源区（约15bp）导入插入片段（Inserts）两端，混合后加入重组酶，即完成质粒构建。该方法可以一步实现多个片段按顺序同时插入载体质粒中。

特点 1. 比传统克隆方法更简单，步骤更少，试剂需求也少，整个流程时间更短。

2. 可同时插入多个插入片段，无需寻找合适的酶切位点。

3. PCR产生的片段无需酶切，线性化载体可以通过酶切或PCR方法产生。

4. 重组产生的DNA接头处不引入任何多余碱基，有利于融合蛋白或核糖体结合位点RBS的构建。

5. 可用于将线性化DNA重新连接成环状，适合定点突变操作。

6. 只要是可以PCR的DNA片段，均可用该克隆试剂盒。

7. 插入n个DNA片段与一个片段所花费的时间是一样的。

保存 -20℃保存18个月（此温度下不会冻结，无需分装）；冰袋运输。

克隆流程

1. 设计用于扩增插入片段（和/或载体质粒）的引物序列，引物上携带合适的重叠序列。

2. 用高保真聚合酶PCR扩增插入片段。（无需考虑产物末端有无A尾，重组过程中将被去除，在最终质粒中不会出现）

3. 用高保真酶PCR扩增（或酶切）将载体质粒线性化。

4. 测定插入片段和线性化载体的浓度。

5. 将插入片段和线性化载体加入Lightening Cloning Master Mix溶液中，50℃水浴15 min。

6. 转化DH5α等感受态细胞。