使用方法
1. 用37℃水浴解冻细胞冻存液,并上下振荡数次混匀。
备注:为了尽量减少污染,未使用完的细胞冻存液最好冻回-20℃,反复冻融不影响使用效果。有沉淀
属于正常情况,主要为DMEM高糖培养基中的脂类与盐类的析出。
2. 用细胞消化液将生长良好的细胞消化成单细胞,并用细胞计数器或血球计数板计数细胞浓度。
备注:悬浮细胞不需要消化但仍需要细胞计数,不易消化成单细胞的各种293细胞等最好使用含有EDTA
的胰酶进行消化。
3. 用低速离心沉淀细胞,弃去上清。
备注:通常2000~3000rpm离心5~10min即可。
4. 用适量细胞冻存液重悬细胞。
备注:细胞浓度可根据情况调整为1~5×106/ml,通常为3×106/ml左右。
5. 按每管1ml分装到细胞冻存管中。
6. 直接放入-70℃冰箱中冻存。
备注:无需程序降温盒或从4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁琐程序降温。
7. 24小时后转入液氮中冻存。
备注:对于不同细胞,使用本细胞冻存液也可在-70℃冰箱中保存数周甚至数月,但建议最好尽快转入
液氮中保存。
8. 复苏方法同常规细胞冻存液。
备注:对于大多数对DMSO不敏感的细胞,复苏时甚至传代前无需去除细胞冻存液,实际上本细胞冻存
液中某些成分具有一定的促细胞生长特性。