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    GeneBiogist one-step哺乳动物细胞冻存液

    GeneBiogist one-step哺乳动物细胞冻存液推荐用于常规哺乳动物细胞的冷冻保存,无需程序降温,可直接放入-70℃保存。该冻存液以DMEM为母液,含有DMSO,不含牛血清或其他蛋白成分。
    具有高效、低毒、无外源因子和易于使用等优点。    
     
    使用方法
    1. 用37℃水浴解冻细胞冻存液,并上下振荡数次混匀。
    备注:为了尽量减少污染,未使用完的细胞冻存液最好冻回-20℃,反复冻融不影响使用效果。有沉淀
    属于正常情况,主要为DMEM高糖培养基中的脂类与盐类的析出。
    2. 用细胞消化液将生长良好的细胞消化成单细胞,并用细胞计数器或血球计数板计数细胞浓度。
    备注:悬浮细胞不需要消化但仍需要细胞计数,不易消化成单细胞的各种293细胞等最好使用含有EDTA
    的胰酶进行消化。
    3. 用低速离心沉淀细胞,弃去上清。
    备注:通常2000~3000rpm离心5~10min即可。
    4. 用适量细胞冻存液重悬细胞。
    备注:细胞浓度可根据情况调整为1~5×106/ml,通常为3×106/ml左右。
    5. 按每管1ml分装到细胞冻存管中。
    6. 直接放入-70℃冰箱中冻存。
    备注:无需程序降温盒或从4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁琐程序降温。
    7. 24小时后转入液氮中冻存。
    备注:对于不同细胞,使用本细胞冻存液也可在-70℃冰箱中保存数周甚至数月,但建议最好尽快转入
    液氮中保存。
    8. 复苏方法同常规细胞冻存液。
    备注:对于大多数对DMSO不敏感的细胞,复苏时甚至传代前无需去除细胞冻存液,实际上本细胞冻存
    液中某些成分具有一定的促细胞生长特性。

     

     

    常见问题:

    1、能否用于干细胞与原代细胞冻存

    有客户用于小鼠的胚胎干细胞,效果不错。因为干细胞与原代细胞,细胞要求较高,可以提供小样客户测试,但是我们自己没有做过干细胞及原代细胞、免疫细胞的相关测试。


    2、能否用于悬浮和贴壁细胞冻存

    可以。我们客户里很多都是用于贴壁细胞的冻存的,贴壁细胞,冻存过程没有特别操作。只是在贴壁细胞转移或者传代过程中,需要先用胰酶消化,再吹悬浮,然后再进行转移。


    3、能否用于人血小板冻存

    没有试过。冻存细胞一般只要盐离子浓度合适即可,客户可根据需求自行尝试


    4、冻存ESC和RSC96细胞复苏率很低,如何处理

    ESC是胚胎干细胞,RSC96是原代细胞,我们的产品是推荐用于常规哺乳细胞冻存,胚胎干细胞和原代细胞都没有做全面测试,有的能用,有的不能用,需要客户测试后购买和正式使用。因为客户冻存的不是我们产品售后范围内,类似的情况我们不能做退换货处理。


    5、2X冻存液如何使用

    吸出原孔一半液体,加入等体积2M冻存液摇匀后即可


    6、细胞在-80℃可以保存多久

    目前检测了3年,一般情况下建议短期内使用的可以放到-80℃冰箱,但是因-80℃冰箱变数较大,如使用人员多、长时间多次打开,经常清点等因素,长期保种可以从-80℃转入液氮。


    7、冻存液颜色有差异

     
    我们的冻存液使用的是DMEM高糖培养基作为母液来配制,DMEM高糖培养基含有酚红,因此在分液的前后由于培养基与CO2接触时间与面积变化,导致ph变化,从而发生颜色的变化,颜色对冻存效果无影响。


    8、冻存液中有沉淀

    沉淀是DMEM高糖培养基中的盐分与脂类,冻存液在-20℃冰箱取出来后,直接在37℃水浴锅中溶解,或4℃过夜溶解后,第二天拿到37℃水浴锅中平衡温度,摇匀后直接使用,沉淀对冻存液效果无任何影响。


    9、冻存液能否在室温长期保存

    可以,但是不建议。在4℃和常温下,如果掉入一个细菌,细菌是可以正常生长,导致细胞的污染,细菌在-20℃无法生长,复苏后抗生素可以抑制细菌的生长,细胞培养不会被污染。


    10、是否准备做备案用于免疫细胞或细胞治疗的细胞冻存

     

    暂时不计划做备案。